Мета роботи: приготувати поживне середовище МС та простерилізувати його автоклавуванням.
Матеріали і обладнання: маточні розчини макро – і мікросолей, Fe – хелату і вітамінів, мезо – інозит, сахароза, агар, 1н HCl і 1н KOH, ваги, шпателі, магнітний змішувач, рН – метр, мірні циліндри – 500 мл, 100 мл, мірні піпетки – 5 мл, 1 мл, ватні пробки, хімічні пляшки на 250 мл.
Хід роботи:
Для приготування 1 л середовища МС необхідно взяти: макро МС – 100 мл; мікро МС – 1 мл; Fe – хелат – 5 мл; В1 – 1 мг; В6 – 1 мг; РР – 0,5 мг; мезо – інозит – 100 мг; сахароза – 30 г (3 %); агар – 7 г.
1. Колбу об’ємом 1 л помістити на магнітний змішувач, налити 250 – 300 мл бідистиляту і додати необхідну кількість макро- і мікросолей, Fe – хелат, вітамінів і фітогормонів.
2. Зважити потрібну кількість сахарози і органічних добавок. Кожну наважку розчиняти у окремій порції бідистильованої води.
3. Довести рН до 5,6 – 5,8 за допомогою 1н КОН або 1н НСl.
4. Наважку агару помістити в термостійкій стакан і залити холодною бідистильованою водою (300 – 400 мл), залишити на 20 хв для набухання і нагріти, постійно помішуючи до повного розчинення агару.
При приготуванні рідкого середовища агар не додається.
5. Додати розчиненний агар до розчину 1 і довести до потрібного об’єму бідистильованою водою. Розчин і воду підігріти.
6. Розлити тепле середовище у колби або пробірки і закрити ватними пробками або фольгою.
7. Простерилізувати середовище в автоклаві при тиску 0,8 – 1 атм ( t0=115 – 120 0С) 20 – 25 хв.
| |
