Мета роботи: оволодіти методикою оцінки основних параметрів росту суспензійних культур клітин.
Матеріали і обладнання: конічні колби на 250 мл з суспензійною культурою клітин, піпетка на 10 мл, 1 мл, фільтр, чашки Петрі, барвник – синій Еванса, мікроскопи, центрифуга, ваги, термостат.
Ріст суспензійних культур клітин оцінюють за параметрами: об’єм осаджених клітин, число клітин, сира і суха маса, вміст білку або ДНК, провідність середовища, життєздатність клітин.
Хід роботи:
1. Визначити об’єм осаджених клітин. 10 мл суспензійної культури переносять в центрифужну пробірку об’ємом 15мл. Центрифугують в бакет – роторі протягом 5 хв, при 2000 об/хв. Визначають об’єм осаду, виражають в відсотках.
2. Підрахувати число клітин під мікроскопом в 0,1 мл (1 краплина) суспензійної культури.
3. Визначити сиру та суху масу. Суспензію профільтрувати через попередньо зволожений і зважений фільтрувальний папір. Клітини промити дистильованою водою і знову зважити разом з фільтром. Це і буде сира маса. Визначення сухої маси провести так само, тільки попередньо зважити сухі фільтри, а потім клітини з сухим фільтром висушити в термостаті при 60°С до того часу, поки їх маса не стане постійною.
4. Для визначення життєздатності клітин суспензії використовують барвник – синій Еванса. В чашку Петрі перенести 1 мл суспензії і додати 1-2 краплі барвника. Потім клітини розглянути під мікроскопом і підрахувати кількість живих незабарвлених клітин.
| |
